一、前言
隨著世界經(jīng)濟一體化的漸漸形成，我國各行各業(yè)與國際接軌正緊張進行著，八十年代以來，各種認證：ＧＭＰ、ＦＤＡ、ＩＳＯ９００１等對制藥企業(yè)進行著一遍遍的洗禮，但它們似乎都忽略了抗生素企業(yè)的一個重要環(huán)節(jié)一茵種室。試想如果沒有一個潔凈合理的菌種操作環(huán)境，如何能保證高質(zhì)量的種子，沒有高質(zhì)量的種子更不能保證抗菌素的高技經(jīng)指標。本文本公司旨在探討如何設(shè)計高標準的菌種室，并呼吁廣大抗生素車間設(shè)計人員，在重視制藥企業(yè)設(shè)計符合ＧＭＰ要求的同時，不要忽略了菌種室。
二、優(yōu)質(zhì)種子的制備要想使菌種室設(shè)計得合理，首先應(yīng)了解菌種是如何制備的。一般抗生素菌種都有兩種功能：一是保障提供生產(chǎn)用優(yōu)質(zhì)種子，二是做試驗，篩選單位更高的菌種。因此必須有兩套無菌室，一套用于生產(chǎn)，一套用于試驗選種，二者不可混淆，以免影響生產(chǎn)?？股鼐N的篩選是一項復(fù)雜而細致的工作，想得到生產(chǎn)上用的優(yōu)質(zhì)種子，必須要經(jīng)過嚴格的菌種選育工作。
1、優(yōu)質(zhì)種子必須具備下列五項條件：
（１）菌種細胞的生長活力強，移種到發(fā)酵罐后能迅速生長以縮短遲滯期；
（２）生理狀態(tài)穩(wěn)定，以使得到穩(wěn)定的菌體生長過程；
（３）具有適宜的菌體總量及濃度以能滿足大容量發(fā)酵的要求；
（４）無雜菌污染，以確保整個發(fā)酵過程正常進行；
（５）保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力，使最終產(chǎn)物的生物合成量持續(xù)穩(wěn)定高產(chǎn)。
2、要想獲得如上所述的優(yōu)質(zhì)種子，則必須具備如下五種條件：
（１）有一種能使保存的菌種轉(zhuǎn)移到存活力能達到最大的復(fù)活培養(yǎng)基上的方法；
（２）有一個不引起種子染菌的接種場所；
（３）具有定量判斷種子質(zhì)量標準的方法；
（４）具有定量測定菌種一系列生理狀態(tài)變化的方法，以能正確地反映生物物質(zhì)的連續(xù)變化；（５）選擇能滿足種子擴大培養(yǎng)的容器和其它環(huán)境條件。下面為以霉菌為例的菌種工藝流程圖。霉菌類孢子的培養(yǎng)多數(shù)采用大米、小米、麥麩等天然培養(yǎng)基。首先將保存于沙土管中的菌種抱子接種在雙碟平皿上，恒溫培養(yǎng)，待孢子成熟后制成孢子懸浮液，然后接種到大米或小米等培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成熟后成為“親米”，由“親米”再轉(zhuǎn)到大米或小米培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成熟后稱為“生產(chǎn)米”，用“生產(chǎn)米”接入種子罐內(nèi)，“親米”和“生產(chǎn)米”的培養(yǎng)溫度一般為２５～２８℃，培養(yǎng)時間隨菌種不同而異，一般為４～１４天。為了使通氣均勻，在培養(yǎng)過程中要注意翻動。按一定接種量接人發(fā)酵瓶，模擬生產(chǎn)過程的試驗，可以摸索菌種生長代謝的最佳工藝條件，并篩選活性最高的菌種保存?zhèn)溆谩Ｖ苽浜玫拇竺谆蛐∶妆ё?，可放在５℃冰庫中保存?zhèn)溆?，或?qū)⒋竺谆蛐∶妆ё佑谜婵粘楦蓾L砂留種，這種干燥抱子菌種可在生產(chǎn)上連續(xù)使用半年左右，這對穩(wěn)定生產(chǎn)很有好處。在制備霉菌池子時，根據(jù)經(jīng)驗通過顯微鏡數(shù)抱子數(shù)，挑選合適的１０倍系列稀釋抱子懸液，以使平皿生長的菌落盡可能分散，以每皿２－３個為最理想。菌落一般長至直徑８～１０ｔｕｒｎ為適，接種時應(yīng)選取中央豐滿部分的抱子，不要觸及菌落邊緣的菌絲。制備大米抱子時，抱子懸浮液的濃度要適當，應(yīng)根據(jù)菌種特性來決定適當濃度。接種使用后的吸管隨即插人肉湯內(nèi)浸一下作無菌檢查。當接種完畢后，應(yīng)將大米等固體培養(yǎng)基敲翻一次，使抱子懸浮液同培養(yǎng)基混合均勻，待抱子成熟后移至５℃冰箱或冰庫中保存?zhèn)溆谩?p#分頁標題#e#
3、菌種定平面布置設(shè)計及注意事項下圖為依據(jù)ＧＭＰ規(guī)范所設(shè)計的菌種室平面布置圖（見圖２）。
３．１在設(shè)計中應(yīng)注意如下問題：
（１）一般菌種室都設(shè)置在發(fā)酵生產(chǎn)車間種子罐操作平面上，如確因空間緊張，也可移至低一層平面。
（２）根據(jù)ＧＭＰ要求萬級潔凈房間需。經(jīng)更衣，并淋浴后進人，而且要有與萬級潔凈區(qū)相適應(yīng)的洗衣房、潔具及潔具清洗間（淋浴室可根據(jù)實際情況確定是否設(shè)置）。
（３）凡萬級潔凈室墻壁需耐清洗消毒的壁板，門窗為不銹鋼或彩鋼板，地面采用水磨石，各種陰陽角均為圓弧狀。
（４）萬級潔凈室送風要單獨成一系統(tǒng)，以免其它崗位的回風污染無菌室的環(huán)境。臨性產(chǎn)、試驗用無菌室分別單獨設(shè)置，確保生產(chǎn)、試驗兩不誤，無菌室內(nèi)放置雙人超凈工作臺以提供局部百級的無菌操作空間。
（5）搖瓶間是接種后種子擴大培養(yǎng)的地方，培養(yǎng)時間一般較長，而且根據(jù)菌種特性還需補料，進出操作頻繁，因而單獨設(shè)置。
（6）恒溫室分為兩類，以霉菌培養(yǎng)為例，一類用于菌種傳代或擴大培養(yǎng)，溫度２５士０．５℃，濕度５０％士５％，搖瓶間即屬于此類恒溫室。另一類用于無菌檢查，溫度３７ｔ０．ｓｔ，濕度５０％ｔ５％，為方便操作，無菌室和恒溫室均由雙層玻璃隔斷與操作間隔開。
（7）為了給生產(chǎn)準備優(yōu)質(zhì)種子和篩選高單位茵種，菌種室每天都要配制不同類型的培養(yǎng)基，用到許多天然培養(yǎng)基和化學試劑，各種三角瓶、試管、平皿等玻璃器皿更是數(shù)以千計，還有其它輔助材料，如棉花、紗布、牛皮紙、濾紙等，因而設(shè)置了試劑庫和材料庫。
（8）以制備霉菌抱子為例，待米抱子成熟后，放人真空干燥器中抽干，然后由雙扉消毒框傳人無菌室滾砂留種。消毒柜用于無菌室所用物品的消毒滅菌。
（9）制備好的砂上抱子或生產(chǎn)抱子，放入冰庫中保存?zhèn)溆?。冰庫為裝配式，配有專用的冷氣機，既保溫又潔凈。
（10）儀器室內(nèi)設(shè)有光電天平、顯微鏡。自動效價測試等精密儀器。
四、本公司案例總結(jié)
菌種室是抗生素發(fā)酵車間至關(guān)重要的一個環(huán)節(jié)，菌種室的設(shè)計要依據(jù)菌種制備工藝流程的特點，萬級潔凈室要符合ＧＭＰ要求，這樣才能使菌種室布置得合理有序，確保為生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種子。
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