一間負壓手術室通常包括一個通風系統(tǒng)，以便空氣從走廊或者任意相鄰區(qū)域流進負壓手術室，同時確保污染的空氣無法從負壓手術室逸出，流入醫(yī)院和衛(wèi)生機構的其它區(qū)域。

自然條件下，空氣從高壓帶向低壓帶流動。如果手術室處于負壓狀態(tài)，外面的空氣則會不斷從門下面流進房間，同時防止房間內滋生的氣態(tài)污染微粒逸出，進入外面的走廊。舉一個常見的負壓室例子，一間帶排氣扇的浴室就是一間負壓室。負壓條件形成后，關閉浴室門，風扇就會阻止不好聞的味道和濕氣逸出浴室。
要產生負壓狀態(tài)，可通過平衡房間的通風系統(tǒng)，讓自動排放的空氣多于自動提供的空氣即可實現(xiàn)。這樣就造成通風不平衡，房間通風系統(tǒng)不斷從房間外面吸進空氣補充。在一間經過精心設計的負壓室里，空氣完全通過門下面的一個縫隙（一般大約半英寸高）流入。除該縫隙外，這間負壓室應該盡可能密封，以防止空氣通過各種其它裂縫和縫隙進入，例如窗戶四周的各種縫隙，墻上照明設備以及插座等。即使房間已經實現(xiàn)了負壓條件，這些地方漏進的空氣仍可能抵消或者消除房間的負壓狀態(tài)。
實現(xiàn)和維持房間負壓以便空氣流進房間所需的最小壓力差非常小（水位表的0.001英寸）。實際實現(xiàn)的負壓值取決于通風系統(tǒng)空氣消耗量與供應量的差額以及房間的結構和大小，包括空氣流動路徑和流動開口。如果房間密封情況良好，則很容易實現(xiàn)高于0.001英寸水位表的負壓值。但如果房間密封情況不佳，正如很多衛(wèi)生機構的實際情況（特別是比較舊的醫(yī)療機構），要實現(xiàn)較大的負壓值可能需要排放量/供應量差值大于通風系統(tǒng)容量。
要在一間通風系統(tǒng)正常運行的條件下實現(xiàn)負壓環(huán)境，首先調節(jié)房間的空氣流動供應量與排放量，實現(xiàn)排放量比供應量高10%或者高50立方英尺/分鐘（取決于較高值）即可。大多數(shù)情況下，這種標準就能夠實現(xiàn)至少0.001英寸水位表的負壓值。如果無法實現(xiàn)0.001英寸水位表的負壓值，也不能通過增加流量差額（在通風系統(tǒng)允許范圍內）實現(xiàn)，則應仔細檢查該房間是否存在縫隙（例如門縫、窗縫、水管裝置和各種嵌入墻壁的裝置等），然后采取補救措施，密封這些裂縫。
房間內的負壓值可通過改變通風系統(tǒng)運行或者打開和關閉房間的門、走廊門或者窗戶而改變。如果已經建立起一種運行結構，應確保妥善關閉負壓室以及其它區(qū)域（例如影響空氣壓力的走廊門）的所有門窗，人員需要進入或離開房間或區(qū)域的情況除外。
煙霧試驗
煙霧試驗是一種很簡單的程序，用于確定房間是否已處于負壓狀態(tài)。將一節(jié)火管置于負壓室門下方，與門保持約2英寸的距離。輕輕擠壓火管球莖，讓火管產生少量煙氣。手持火管，與門保持平行，煙氣從管道中慢慢排出，確保煙霧排出速度低于空氣速度。如果房間已處于負壓條件，煙霧則會從門下方流入房間。如果房間處于非負壓條件，煙霧則會吹向門外或者保持靜止不動。#p#分頁標題#e#

該試驗必須在門保持關閉的情況下進行，并且，房間的所有窗戶也必須緊閉。如果房間的空氣凈化器已在運行（包括通風柜或者生物安全柜），必須保持運行。如果房間有接待室，則應測試從走廊到接待室以及接待室到房間的壓力差。

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